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蛋白免疫印迹Western Blot(WB)检测

实验原理:

蛋白免疫印迹Western Blot(WB)是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离细胞或者组织样本中的蛋白,经转膜、封闭后目标蛋白与特异性一抗结合,再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗一抗种属抗体结合,经过底物催化,分析曝光条带的位置和灰度分析,获知目标蛋白在样本中的表达情况。

该方法结合了凝胶电泳和固相免疫测定两种技术的高特异性和高敏感性,可以对目标蛋白进行pg级别的定性和半定量的分析。

服务内容:

步骤一:检测样本的准备(组织、细胞、血清、渗出液等),合适的 WB 抗体的选择。

步骤二:蛋白质样本制备,根据实验要求选择制备总蛋白、膜蛋白、浆蛋白或核蛋白。

步骤三:SDS-PAGE 凝胶电泳分离蛋白,将分离的蛋白转移到固相支持载体(NC膜,PVDF 膜)。

步骤四:目标蛋白的免疫学检测,化学发光(ECL)显示蛋白。

步骤五:出具优化后的客观技术服务报告。

客户提供:

细胞样本:细胞/细胞上清液/细胞裂解液等

组织样本:组织/组织匀浆等

血样:血清/血浆/体液等

另请注意:

1)客户告知实验分组、编号及背景设计资料,有具体要求请事先说明;

2)抗体事先咨询,明确是否有该抗体可使用,可提供代购;

3) 双方沟通后确认标本收集、保存与运送:

组织样品:新鲜组织放入液氮或-70 度保存,组织不少于100mg以干冰运输;

细胞:通过细胞计数取不少于2×106 个细胞于EP 管,加入0.5ml 生理盐水或蛋白保护剂,混匀后保存于冰箱(-70℃,避免反复冻融);以干冰运输或加入蛋白保护剂后,加冰袋寄送;也可细胞瓶常温运输,注意瓶口密封,防止污染;

血液细胞:以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml 生理盐水或蛋白保护剂,保存(-70℃可长期保存,避免反复冻融);加冰袋寄送(3天内需到达,保证冷藏条件),或干冰运输;

血清或细胞培养液标本:离心去掉杂质后取上清入EP 管,保存(4℃可保存15-20 天,-70℃可长期保存,避免反复冻融);加冰袋寄送(3天内需到达,保证冷藏条件)

交付内容:

实验报告:含Tif原图,实验涉及设备及试剂耗材等,实验详细步骤,实验图标注(分子量、条带信息)等。

注意:本服务结果只提供实验优化后一次重复结果,若需要重复2-3次结果,请提前沟通联系,确认额外增收费用。

服务列表:

项目 周期
WB代检测服务 10个工作日

收费明细:

项目 收费标准
WB检测(目的蛋白指标*1) 800/膜/次
WB检测(目的蛋白指标*2) 1100/膜/次

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